【摘要】  目的研究健胃补脾汤对乙醇所致小鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制。方法将健康昆明小白鼠120只，随机分成5组：正常对照组、模型对照组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组。中药低、中、高剂量组分别以3ml/kg鼠重、6ml/kg鼠重、12ml/kg鼠重健胃补脾汤水煎剂灌胃，之后再以8ml/kg鼠重25%乙醇溶液灌胃;模型对照组以8ml/kg鼠重25%乙醇溶液灌胃;正常对照组以8ml/kg鼠重生理盐水灌胃。以上各组按上述给药方法每日1次，连续给药7天。于第6天给药结束后，禁食不禁水24h。末次给药后2h，分别测定各组的血清中一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)的含量，并在光学显微镜下观察小鼠胃黏膜组织学变化，以评价药物对胃黏膜损伤的预防保护效果。结果血清中NO含量，模型对照组与各中药治疗组血清NO含量均显著低于正常对照组，且具有统计学意义;中药低剂量组血清NO含量高于模型对照组，但不具有统计学意义;中药中剂量组血清NO含量高于模型对照组，且具有统计学意义;中药高剂量组血清NO含量显著高于模型对照组，且具有统计学意义;各中药治疗组之间，中药低剂量组与中药中剂量组、中药高剂量组存在统计学意义;中药中剂量组与中药高剂量组之间不存在统计学意义。血清中PGE2含量，模型对照组与各中药治疗组血清PGE2含量均显著低于正常对照组，且具有统计学意义;中药低剂量组血清PGE2含量高于模型对照组，但不具有统计学意义;中药中剂量组与高剂量组血清PGE2含量高于模型对照组，且具有统计学意义。各中药治疗组之间，中药低剂量组与中药中剂量组，以及中药中剂量组与中药高剂量组之间不存在统计学意义，中药低剂量组与中药高剂量组之间存在统计学意义。光镜也显示中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组的损伤程度及炎症反应较模型对照组明显减轻。结论健胃补脾汤对乙醇所致的小鼠胃黏膜损伤有一定的预防保护作用，其保护作用是通过增加血清NO和PGE2，从而舒张血管，增加胃黏膜血流量来实现的。

【关键词】  健胃补脾汤;小鼠;乙醇性胃黏膜损伤;血清NO;血清PGE2

　　急性胃黏膜病变系指机体在严重创伤、感染、休克等应激状态下，发生以胃黏膜损害为主的病理改变和上消化道出血为特征的临床病征[1]。在正常生理状态下，胃黏膜的屏障作用能抵御各种外源性和内源性损伤物质的攻击，维持胃腔与胃黏膜内氢离子梯度状态。而在攻击因子的刺激或应激状态下，将会导致胃黏膜屏障破坏，如乙醇在胃内经乙醇脱氢酶作用可被氧化成乙醛而损伤胃黏膜，乙醇可影响胃酸分泌、引起胃组织产生损伤性介质使胃黏膜损伤性因素增强,损伤胃黏膜屏障、减少胃黏膜保护性物质含量[2，3]。临床主要使用H2受体拮抗剂或质子泵抑制剂抑制胃酸分泌，或具有黏膜保护作用的药物如硫糖铝作为预防措施。但有相当一部分患者或者症状无明显改善，或者需要长期服药，停药后症状易复发，且存在副作用大、作用单一等缺点。而中医中药防治胃黏膜损伤有其自身特点及优势，可多靶点、多层次、多途径保护胃黏膜。近年来许多学者在此领域做了大量研究工作，发现并证实许多中药单味药及复方制剂具有明显的胃黏膜保护作用。常江[4]通过对大鼠乙醇性急性胃黏膜损伤的研究，采用Corne和Bolton的阿辛蓝染色法测定证实，丹参可促进胃壁结合黏液分泌，先后用消炎痛抑制和外源性PGE1反抑制实验，提示其促进黏液分泌作用可能部分是由刺激内源性的前列腺素(PGs)合成和释放所介导。预先灌服香砂六君子汤煎剂后经大鼠胃内注入0.2mol/L NaOH的实验显示该方能明显抗NaOH造成的胃黏膜出血及条索状的损伤。洪缨[5]用阿辛蓝染色法测胃壁结合黏液量显示该方有增加胃壁结合黏液量的趋势。刘宝臣[6]用人参、黄芪、甘草、白芍等健脾益气中药制成“胃黏膜保护方”，发现可以预防乙醇、强酸、强碱造成的黏膜出血性损伤。健胃补脾汤是临床治疗胃脘痛、嘈杂的经验方，选用党参、白术、茯苓、甘草、半夏、陈皮、黄连、吴茱萸、海螵蛸、煅瓦楞子、蒲公英、白及十二味中药。本实验旨在通过动物实验观察健胃补脾汤对乙醇性胃黏膜损伤的预防和保护作用，并从血清NO、血浆前列腺素E2等多方面探索可能的作用机制。

　　1材料与方法

　　1.1实验动物健康昆明小白鼠120只，体重25~30g，雌雄各半，浙江中医药大学实验动物中心提供。标准饲料饲养于浙江中医药大学实验动物中心。

　　1.2实验药品95%乙醇：500ml/瓶，浙江省中医院，批号：090825;氯化钠注射液：250ml/瓶，浙江平湖莎普爱思制药有限公司，批号：090913;总一氧化氮检测试剂盒：江苏海门碧云天生物技术研究所，批号：20090418;小鼠前列腺素E2试剂盒：上海西唐生物科技有限公司，批号：20090604。

　　1.3实验器材小鼠灌胃器，烧杯，量桶，电子分析天平(上海天平仪器厂)，台式高速离心机(上海医用离心机厂)，Olympus光学显微镜(日本Olympus公司)。

　　1.4药物制备

　　1.4.125%乙醇制备取适量95%乙醇，用生理盐水配制成25%乙醇溶液。

　　1.4.2健胃补脾汤制备党参10.0g，白术10.0g，茯苓10.0g，甘草6.0g，陈皮10.0g，制半夏10.0g，黄连6.0g，吴茱萸3.0g，海螵蛸15.0g，煅瓦楞子15.0g，蒲公英15.0g，白及10.0g，上述十二味药药材均由浙江中医药大学附属第一医院中药房提供，并在中药房煎取水煎剂。

　　1.5实验方法

　　1.5.1动物选择与分组取健康昆明小白鼠120只，体重25~30g，称重后编号，随机分成5组，每组雌雄各半，分别为正常对照组、模型对照组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组，每组动物均为24只。

　　1.5.2实验步骤中药低剂量组3ml/kg鼠重，健胃补脾汤水煎剂灌胃;中药中剂量组6ml/kg鼠重，健胃补脾汤水煎剂灌胃;中药高剂量组12ml/kg鼠重，健胃补脾汤水煎剂灌胃，之后再以8ml/kg鼠重，25%乙醇溶液灌胃。模型对照组以8ml/kg鼠重 ，25%乙醇溶液灌胃;正常对照组以8ml/kg鼠重，生理盐水灌胃。以上各组按上述给药方法每日1次，连续给药7天。于第6天给药结束后，立即禁食不禁水24h。末次给药后2h，以眼球摘除法取血及处死;剖腹取胃后，沿胃大弯剪开胃，4℃的生理盐水中轻轻漂洗后，于胃窦部剪取胃组织。

　　1.5.3观察指标

　　1.5.3.1病理学检查在胃窦的相同部位切取5mm×5mm的胃黏膜组织，用10%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm厚度连续切片，HE染色，在显微镜下观察各组胃黏膜的病理学改变。

　　1.5.3.2各组血清中一氧化氮(NO)的含量取小鼠血1ml，注入1.5 ml的离心管中，静置10min，4℃下2500r/m离心，20min后取上清液(≥50μl)，-20℃保存至测定。以Griess法检测血清NO含量，测定时严格按照说明书操作进行。

　　1.5.3.3各组血清中前列腺素E2(PGE2)的含量取小鼠血1ml，注入1.5ml的离心管中，静置10min，4℃下2500r/m离心，20min后取上清液，-20℃保存至测定。以ELISA法检测血清中PGE2含量，测定时严格按照说明书操作进行。

　　1.6统计学方法计量资料用均数±标准差(x±s)表示。用SPSS13.0软件统计包对各组数据进行统计分析。多组间均数比较用方差分析，均数间两两比较用q检验。均以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1各组小鼠胃黏膜改变

　　2.1.1肉眼大体观察正常对照组小鼠胃黏膜呈粉红色，表面光滑，黏膜皱襞光整，表面无充血水肿，未见溃疡、糜烂、出血点。模型对照组小鼠胃黏膜皱襞光整，可见点状出血点。中药治疗组小鼠胃黏膜皱襞光整，其中低剂量组偶见点状出血点。

　　2.1.2病理学检查病理学检查显示：在光学显微镜下，正常对照组胃黏膜结构正常，层次清楚，黏膜层无炎性细胞浸润;模型对照组上皮局部腺体结构紊乱，黏膜表面及腺腔内少量炎性渗出物，高倍镜下中性粒细胞增多明显。各中药治疗组腺体排列较整齐，少量炎性细胞浸润，未见坏死组织及出血。

　　2.2各组血清中NO的含量见表1。表1各组血清中NO的含量表1结果显示血清NO含量，模型对照组与各中药治疗组血清NO含量均显著低于正常对照组，且差异有统计学意义(P<0.01);中药低剂量组血清NO含量高于模型对照组，但差异无统计学意义(P>0.05);中药中剂量组血清NO含量高于模型对照组，且具有统计学意义(P<0.05)，中药高剂量组血清NO含量显著高于模型对照组，且差异有统计学意义(P<0.01)。各中药治疗组之间，中药低剂量组与中药中剂量组、中药高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)，中药中剂量组与中药高剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

　　2.3各组血清中PGE2的含量见表2。表2各组血清中PGE2的含量表2结果显示血清PGE2含量，模型对照组与各中药治疗组血清PGE2含量均显著低于正常对照组，且差异有统计学意义(P<0.01);中药低剂量组血清PGE2含量高于模型对照组，但差异无有统计学意义(P>0.05);中药中剂量组与高剂量组血清PGE2含量高于模型对照组，且差异有统计学意义(P<0.05)。各中药治疗组之间，中药低剂量组与中药中剂量组，以及中药中剂量组与中药高剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)，中药低剂量组与中药高剂量组之间差异有统计学意义(P<0.05)。

　　3讨论

　　胃是乙醇较早接触的重要器官，乙醇经胃吸收后, 由于胃内存在有乙醇脱氢酶和黄嘌呤氧化酶, 前者催化乙醇生成乙醛, 后者可催化乙醛代谢产生自由基，自由基在酒精性胃黏膜损伤过程中具有重要作用[7，8]。乙醇作为一种损伤因子，是常见的急性胃黏膜损伤模型之一[9]。实验研究表明，乙醇性胃黏膜损伤时，胃黏膜充血、水肿，甚者糜烂和出血，病理改变是胃黏膜损伤，如腺体结构紊乱、炎性渗出等。本实验结果显示：25%的乙醇灌胃所致的胃黏膜损伤，预先给予小鼠胃内灌注健胃补脾汤，可减轻胃黏膜的损伤程度。肉眼大体观察模型对照组小鼠胃黏膜皱襞光整，可见点状出血点。而中药治疗组小鼠胃黏膜皱襞光整，其中低剂量组偶见点状出血点。国内外研究表明，氧自由基的大量生成是乙醇性急性胃黏膜损伤的重要发生机制之一。内源性NO能够清除氧自由基,改善胃黏膜微循环,减轻急性胃黏膜损伤程度,对胃黏膜有保护作用[10]。NO作为内源性血管舒张因子，可有效舒张血管，增加胃黏膜血流量，降低血管的通透性以维持血管壁的完整性，防止胃黏膜损伤，并可促进黏液合成，增加黏液层厚度，加强黏液屏障作用，抑制胃酸分泌。根据本实验研究血清NO的含量结果显示，健胃补脾汤对乙醇性胃黏膜损伤的保护作用，可能是通过提高血清NO含量实现的，并存在量效关系，中、高剂量的保护作用要优于低剂量。实验研究[11，12]认为前列腺素(PGE2)合成减少可能在乙醇引起胃黏膜损伤中起着重要作用。据本实验结果显示，测定血清中PGE2的含量表明，健胃补脾汤有提高血清PGE2的作用，从而对乙醇性胃黏膜损伤起保护作用，并存在量效关系，中、高剂量的保护作用要优于低剂量。

　　4结论

　　本实验证实，健胃补脾汤对乙醇性胃黏膜损伤具有较好的预防和保护作用，其中中剂量与高剂量的效果比低剂量更好。健胃补脾汤可一定程度增加血清NO含量，且存在量效关系。这是其预防和保护乙醇性胃黏膜损伤的作用机制之一。健胃补脾汤可一定程度增加血清PGE2含量，且存在量效关系。这是其预防和保护乙醇性胃黏膜损伤的作用机制之一。

【参考文献】
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　　2何绍珍，任建林. 乙醇对胃黏膜作用机制的研究进展. 世界华人消化杂志，2005,(21)：15-17.

　　3房殿春，彭志红. 胃黏膜屏障功能研究概况. 现代消化及介入诊疗，2007,(1)：21-23.

　　4常江，邓长生，沈佩弟，等. 丹参对大鼠乙醇性胃黏膜损伤的保护作用的研究. 中国病理生理杂志，1994，10(1)：27-29.

　　5洪缨，孟紫芊，冯卫红，等. 小柴胡汤、香砂六君子汤对胃黏膜保护作用的实验研究. 北京中医药大学学报，1994，17(5)：57-59.

　　6刘宝臣，沈鹰. 胃黏膜保护方对大白鼠黏液和胃黏膜血流的作用. 中华消化杂志，1990，10(6)：359.

　　7Brzozowski T, Konturek PC, Konturek SJ, et al.Implications of reactive oxygen species and cytokines in gastroprotection against stress-induced gastric damage by nitric oxide releasing aspirin. Int J Colorectal Dis,2003,18: 320-329.

　　8Kwiecien S, Brzozowski T, Konturek SJ. Effects of reactive oxygen species action on gastric mucosa in various models of mucosal injury. J Physiol Pharmacol,2002,53: 39-50.

　　9谢勇，李小平，王崇文,等.实验性乙醇胃黏膜损害中胃肠激素表达变化及意义.中国现代医学杂志. 1998，3(11)：151-157.

　　10李春艳，刘丽娜，吕申，等.一氧化氮与氧自由基在大鼠急性乙醇性胃黏膜损伤中的作用.中国病理生理杂志，2004，20(10)：1777.

　　11Liu ES, Wong BC, Cho CH. Influence of gender difference and gastritis on gastric ulcer formation in rats. J Gastroenterol Hepatol,2001,16:740-747.

　　12Saeki T, Ohno T, Kamata K,et al. Mild irritant prevents ethanol-induced gastric mucosal microcirculatory disturbances through actions of calcitonin gene-related peptide and PG12 in rats. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2004,286: 68-75.