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【摘要】 目的 探讨抗核抗体(ANA)荧光核型与ANA谱3(IgG)15项抗体之间的关系。 方法 对济宁医学院附属医院门诊及住院的自身免疫性疾病(AID)患者进行检测，ANA采用间接免疫荧光法检测，ANA谱3(IgG)15项抗体采用欧蒙免疫印记法检测。结果 362例ANA阳性标本中单一核型中核均质型72例，核颗粒型135例，胞浆颗粒型26例，核仁型11例，着丝点型20例，核膜型1例，细胞骨架型2例，高尔基体型1例，其余为混合核型，其中ANA谱3(IgG)15项抗体阳性率为84.3%(305/362)。核均质型常见抗体为抗核小体、Ro-52、dsDNA、组蛋白抗体。核颗粒型常见抗体为抗Ro-52、SSA、nRNP、SSB、Sm和抗RIB抗体。胞浆颗粒型常见抗体为抗Ro-52、SSA和 抗RIB抗体。 结论 ANA是AID的筛查实验，而ANA谱3(IgG)15项抗体对于AID具有鉴别意义，两者需要平行检测，防止漏诊，通过核型找到ANA谱3(IgG)15项抗体中相对应的阳性抗体，提高诊断率。 【关键词】 抗体，抗核; 光谱核型分析; 免疫印迹法; 自身免疫疾病 抗核抗体(ANA)是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称，是自身免疫性疾病(AID)的重要标记。由于细胞核成分的复杂性和不同的抗原性，因此可产生多种类型的ANA。ANA核型主要用于筛查，而抗体的确证实验则对于AID的诊断和鉴别意义较大。目前国内许多医院开展了自身抗体ANA和抗可提取性核抗原(ENA)抗体的检测，对诊断AID、判断疾病活动程度、观察治疗效果、指导临床用药等方面具有重要意义。本文则通过对ANA荧光核型与15种抗体的对比分析，探讨常见ANA荧光核型与ANA谱中阳性抗体的关系。 一、对象和方法 1. 对象：362例检测标本均来源于2008～2010年在济宁医学院附属医院门诊及住院的ANA阳性AID患者。其中男性有25例，占总例数的6.9%。 2. ANA谱3(IgG)检测方法：采用欧蒙印迹法，试剂盒由德国欧蒙公司提供，用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP、Sm、SSA、Ro-52、SSB、SCL-70、PM、JO-1、着丝点、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、RIB、AMA M2等15种不同抗原IgG类抗体，检测膜条上平行包被了这些高度纯化的抗原。第一次温育时，经1∶101稀释的患者血清与膜条上的抗原反应，如果样本阳性，特异性的IgG与相应的抗原结合。为检测已结合的抗体，加入酶标抗体IgG(酶结合物)进行第二次温育，然后加入酶底物，以产生可观察的颜色反应，在欧蒙提供的软件上进行分析。 3. ANA检测方法：采用ANA马赛克间接免疫荧光法，试剂盒来源于德国欧蒙公司，专用于体外检测人血清或血浆中的ANA。每个反应区同时有2种抗原基质：猴肝组织和Hep-2细胞。在第一次温育时，将1∶100稀释的血清与固定在载片反应区上生物薄片中的Hep-2细胞和灵长类肝脏组织反应。如果标本阳性，特异性IgA、IgG和IgM抗体与相应核抗原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模型。Hep-2细胞及猴肝组织均无特异性荧光为阴性。Hep-2细胞和猴肝组织产生明显特异性荧光为阳性，比较两种基质产生的荧光模式可进一步对ANA进行分型，荧光较暗核型不易区分者为弱阳性。ANA谱、ANA荧光核型检测结果对比，采用双盲法。仪器设备为Olympus BX51型荧光显微镜、生化摇摆平台。 4. 统计学分析：采用SPSS 16.0统计软件进行χ2检验分析。 二、结果 362例ANA阳性标本单一核型中核均质型72例，核颗粒型135例，胞浆颗粒型26例，核仁型11例，着丝点型20例，核膜型1例，细胞骨架型2例，高尔基体型1例，其余为混合核型，其中ANA谱3(IgG)15项抗体阳性率为84.3%(305/362)。经统计学分析各核型ANA中抗ANA谱3(IgG)抗体阳性率差异无统计学意义(χ2=15.025，P>0.05)(表1)。表1 ANA荧光核型阳性病例中ANA谱3(IgG)抗体的阳性情况表2 各种荧光核型与ANA谱3(IgG)15项抗体的结果分析 三、讨论 在AID的多种自身抗体中，ANA是一组具有多种细胞核成分的自身抗体，是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，ANA靶抗原分布由传统的细胞核抗原扩展到现在的整个细胞，包括细胞核、细胞骨架、细胞质、细胞分裂周期等，可与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性[1]。间接免疫荧光法检测ANA，因其基质中含有完整的抗原谱(如细胞核和细胞质抗原)，可检测到几乎所有的ANA。如果存在ANA，就会在细胞中抗原相应的位置出现荧光反应，产生特征性的荧光模型，有一定临床参考价值[2]。某种荧光模型常伴有特定的ANA和AID，目前发现抗nRNP/Sm、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体等存在时荧光模型为核颗粒型;抗dsDNA、抗核小体抗体和抗组蛋白抗体为核均质型;细胞质中抗核糖体P蛋白抗体为浆颗粒型[3]。 本文研究发现，抗nRNP抗体及抗Sm抗体主要在为核颗粒型出现;抗Ro-52抗体主要在核颗粒、核均质和胞浆颗粒中出现，抗SSA、抗SSB也主要在上述三种核型中出现;抗dsDNA、抗组蛋白、抗核小体抗体主要在核均质类型的荧光核型中出现。抗着丝点抗体对着丝点核型的诊断具有特异性，在20例着丝点核型中抗着丝点抗体的出现率为100%。检出率较低者中抗PM检出率为0，其次是抗JO-1、SCL-70抗体和抗PCNA抗体，检出率分别为1.1%、2.8%、2.2%。混合型中出现率最高的是核均质颗粒型，这与各种AID的发病率有关，对应各种核型的常见15种特异抗体，其阳性率>75%，由于方法学不同，各种检验方法的灵敏度和特异性不同。此两种方法的结合对AID的诊断有重要价值。 本实验结果显示的不同荧光核型的ANA与抗ENA抗体之间的关系和此大部分较一致，但荧光核型为均质型时，JO-1检出率偏低，与文献报道不一致。同时本文统计的抗SCL-70抗体统计的阳性率只有2.8%，与文献报道的相一致[4]，检出率低这一原因还有待进一步研究。 在ANA的核型与各抗体的关系方面各抗体类型同ANA荧光核型之间没有绝对的规律可寻[5]， 尽管荧光染色模型具有一定的提示作用，但一种自身抗体可以出现不同的荧光染色模型，不同的自身抗体也可以出现相同的荧光染色模型，仅根据荧光染色模型特点来推断自身抗体的特异性是出现错误判断的重要原因。所以不能简单的依据荧光核型来推断相应的抗体的具体类型。以前仅检测ENA，对其他抗体没有进行检测， ENA多肽抗体主要包括抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗Ro抗体和抗La抗体等，ENA多肽抗体是针对核内ENA的一种自身抗体，ENA抗原可用盐水或磷酸盐缓冲液从细胞核中提取[6]。不同的AID可产生不同的抗ENA多肽抗体，不同特性的抗ENA抗体在各种AID中的阳性率不同[7]。本文则对15种不同抗原IgG类抗体进行了检测，提高了ANA荧光核型阳性时ANA谱的阳性率，本实验阳性率达84.3%，依然有15.7%的漏诊率。ANA谱3(IgG)应用欧蒙印迹法检测，为一种先进的诊断技术，灵敏度高，结果可靠，它的普及对于AID的诊断具有重要意义。 从上述实验结果可以看出，AID诊断既需要荧光ANA检测，也离不开对单一抗原的检测。利用间接免疫荧光法ANA检测的高敏性和欧蒙印记法检测的高特异性，可以证实血清中的确存在哪些与疾病相关的抗体，为自身免疫性结缔组织病的诊断提供帮助，将两种方法或更多的方法结合起来有利于AID的诊断及预后观察。
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